尊龙凯时为您提供的“人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45”培养指导，旨在帮助您顺利进行细胞培养。以下是详细的培养条件及步骤：

一、细胞培养条件

细胞名称：人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45

生长特性：悬浮生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）进行冻存

培养体系：1640培养基（含NaHCO3 15 g/L）+ 10% FBS + 1% P

传代方法：首次传代比例为1:2。每两天更换培养基。

备注：请用无菌离心管收集培养基，以备对比培养，如对比效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

在细胞状态良好时，灌装完全培养液并密封瓶口是最佳处理方式。收到细胞后，请用75%酒精喷洒细胞瓶，消毒后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续操作。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（最佳为40x、100x和200x），前三天的照片为重要依据，未提供照片将默认收到状态良好。（传代后建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，换液时将瓶盖松开。）

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，将瓶中完全培养液收集至离心管，仅保留5ml完全培养基，再放入37℃、5% CO2孵箱培养。若细胞密度超过80%，可进行传代，步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶，置于37℃培养箱消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞状态。若细胞大部分变圆并脱落，立即将瓶子取回操作台，轻轻敲打培养瓶后加入超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保其完全脱落后吸出，转移到15ml离心管中，1000 RPM下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例将细胞悬液分瓶（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至培养瓶的80%覆盖时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，然后观察细胞状态，待其变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冷冻箱。如需后期转入液氮罐，需在-80℃保存24小时以上后再进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（请佩戴防护装备），迅速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶并放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。
4. 次日更换为新的完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞对培养基的附着不牢，在运输过程中可能会发生细胞脱落，这是正常现象。如脱落较多，可将所有培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养。沉淀后的细胞可加入胰酶1-2ml，轻轻吹打待细胞脱落后，再使用完全培养基终止反应。之后重复离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，最后按1:2比例进行分瓶传代。

五、售后条款

1）细胞出现问题时的重发条件

以下情况可申请重发：

• 细胞运输过程中遭遇丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等。
• 细胞污染问题，需在收到产品48小时内提供真实实验结果。
• 常温发货的细胞如果静置24小时后，干冰发货的细胞复苏后24小时多数细胞未存活，需要提供真实细胞状态照片。
• 干冰发货的细胞复苏24小时后或常温发货的细胞静置4小时未开封后出现污染。
• 细胞活性问题，需在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法进行鉴定。
• 收到细胞当天及第2、3天拍照记录，3天内未告知的视为产品合格。
• 4-7天内出现问题，需提供收到细胞前3天的照片及操作详细步骤，经过技术人员判定后可重发。

2）细胞出现问题时的非重发情况

以下情况不予重发：

• 客户造成的细胞污染。
• 客户不正确操作导致的细胞状态不佳。
• 非尊龙凯时推荐的细胞培养体系造成的细胞状态不佳。
• 细胞状态不佳，未提供细胞培养前3天的照片。
• 细胞培养时经过其他处理。
• 收到细胞2天内未告知的。
• 具体情况视定。