一、细胞培养条件

细胞名称：人胃癌细胞MGC803

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640+10%FBS+1%P

传代方法：首次传代比例建议为1:2

传代情况：每两天更换培养基

备注：务必用无菌离心管收集培养基瓶中的液体，以便进行对比培养。如对比效果不佳，建议直接使用尊龙凯时提供的完全培养基。

二、细胞处理和培养

收到细胞后，待培养状态良好时，灌满完整的培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。在收到细胞后，需用75%酒精喷洒整个细胞瓶以进行消毒，然后放置在超净台进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱内静置3-4小时，稳定细胞状态后可以进行处理。显微镜下观察细胞生长情况，并拍照记录（建议拍摄40x,100x,200x各一张），前三天拍的照片是重要的售后依据，若未提供照片，默认为收到状态良好。进行传代时，建议将一瓶用原瓶的完全培养基，另一瓶用自配的完全培养基以便进行对比，换液后需将瓶盖松开。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

在细胞未超过80%汇合度时，收集培养液并留5ml完全培养基置于37℃、5%CO2的培养箱中；如果细胞密度超80%，可进行传代，步骤如下：

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
加入0.25%胰蛋白酶消化液（1-2ml），在37℃培养箱中消化1-2分钟。显微镜下观察细胞情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速将培养瓶移至操作台，轻敲后加入5ml以上的完全培养基，终止消化。
轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出悬液，转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
加入0.25%胰蛋白酶消化液（约1ml），观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃去上清，细胞沉淀后加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱储存，若需后期转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放超过24小时后再转入。

c. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管（佩戴防护装备），迅速放入37℃水浴中解冻，直至无冰晶后，用75%酒精擦拭外壁。
将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃上清，重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放置于37℃、5%CO2培养箱中。
次日换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

由于某些细胞的附着性较差，运输过程中可能会出现细胞脱落现象，这是正常的。如果脱落较多，请将所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，留取上清用于对比培养。沉淀细胞后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打并消化1-2分钟，然后加5ml完全培养基终止反应，再离心，弃上清，补加1-2ml完全培养基重悬。之后按1:2比例分瓶传代，补充新的完全培养基，放入37℃、5%CO2的细胞培养箱继续培养。

五、售后条款

1) 重发情况

因运输问题导致细胞丢失、瓶破损、培养液外泄等可重发。
细胞污染需在收到48小时内提供真实实验结果，经核实后重发。
常温发货细胞如静置24小时后，干冰发货细胞复苏后24小时未存活（需提供真实照片）可重发。
干冰发货细胞复苏后或常温细胞静置4小时未开封出现污染，需重发。
细胞活性问题需在收到后7天内提供实验结果，经核实后重发。
收到细胞当天及第2、3天需拍照，未告知的视为合格。四到七天内出现问题需提供前3天照片及相关操作步骤，技术人员判定为我方责任，则重发；如属双方责任则协商处理，或按合同价50%重发。

2) 不予重发情况

由于客户原因导致的细胞污染，不予重发。
因客户不当操作导致细胞状态不佳的不予重发。
非推荐培养体系造成的问题，不予重发。
细胞状态不佳且未提供前3天照片的不予重发。
细胞培养中经过其他处理的不予重发。
收到2天内未告知的问题，不予重发。
视具体情况而定。

通过遵循以上指南及采用尊龙凯时的优质细胞产品，研究者能有效维护细胞状态，确保实验顺利进行。